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基因擴增實驗室 專業(yè)凈化工程

基因擴增實驗室 專業(yè)凈化工程

更新時間:2025-01-20

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簡要描述:
PCR實驗室由緩沖區(qū)及四個單獨的工作區(qū)域
緩沖區(qū)、試劑儲存和準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增反應混合物配制和擴增區(qū)、擴增產物分析區(qū)。為避免交叉污染,進入各個工作區(qū)域必須嚴格遵循單一方向進行,即只能從試劑儲存和準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增反應混合物配制和擴增區(qū)→擴增產物分析區(qū)。
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PCR實驗室建立方法

1、建立樣品準備區(qū)

這個區(qū)域專門用作樣品的準備,在制備和操作用于核酸提取的試劑時應該采取預防措施:⑴PCR產物和帶有要擴增序列的DNA克隆不能在這個房間操作。⑵組織培養(yǎng)物、組織標本和血清樣品都帶進樣品準備間處理,以根據應用的需要提取DNA或RNA。⑶用于樣品處理的工具不能被用作普通分子克隆的工具,也不能用作操作靶序列。⑷DNA樣品應該用有專門的防護或正壓活塞式移液管操作,以防止在吸取樣品時有氣溶膠遺留。⑸大體積樣品應該用單獨包裝的無菌一次性移液管吸取。⑹管子打開前都要簡短離心以減少氣溶膠的產生,而且管子不能用力崩開,這樣會產生氣溶膠。⑺任何時候都應該穿實驗服和帶手套,手套要經常更換,尤其在抽提過程中每一步之間都要更換。實驗服要專門用于樣品準備間,經常清洗。

2、樣品準備和RNA-PCR RNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品操作,這樣增加了樣品之間污染的機會。為了避免這一問題,反轉錄一步可以在樣品準備區(qū)進行。在RNA-PCR中應用UNG以防止污染的方法也有報道。

3、建立前PCR區(qū)。

該去專門用于準備各種反應,這個區(qū)域必須保持干凈,而且沒有來自克隆和樣品準備的污染。前PCR區(qū)必須要有試劑和準備,特別是專門用于前PCR區(qū)的正壓活塞式移液管。


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