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    PCR實驗室設(shè)計及建設(shè)要求

    發(fā)布時間: 2021-11-27  點(diǎn)擊次數(shù): 4205次

     

    PCR實驗指的是基因擴(kuò)增實驗,其特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加,是分子生物學(xué)研究和實驗的常規(guī)方法,PCR實驗室廣泛應(yīng)用于生物學(xué)各個領(lǐng)域,博泰小編帶大家了解PCR實驗室設(shè)計及建設(shè)要求有哪些。


    、PCR實驗室布局

    PCR實驗室原則上為試劑準(zhǔn)備區(qū),樣品制備區(qū),擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)四個單獨(dú)的工作區(qū)域,并設(shè)有專用走廊,各工作區(qū)域應(yīng)設(shè)緩沖間,工作區(qū)與緩沖間宜安裝連鎖裝置。不同功能的工作區(qū)應(yīng)是分隔獨(dú)立的,各工作區(qū)有明顯的標(biāo)志,不能直通,如果緊密連接,需安裝物品傳遞窗。前兩區(qū)為擴(kuò)增前區(qū),后兩區(qū)為擴(kuò)增后區(qū)。


    、實驗室各區(qū)功能及主要設(shè)備

    1試劑準(zhǔn)備區(qū):主要進(jìn)行試劑的制備,分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑盒用于樣品制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的試劑。本區(qū)主要設(shè)備有天平,冰箱,離心機(jī),加樣器,振蕩器等。


    2、樣品制備區(qū):主要進(jìn)行樣品的保存,核酸提取,貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測定DNA的合成。本區(qū)主要設(shè)備有冰箱,生物安全柜,離心機(jī),加樣器,振蕩器等。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為正壓,以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染,一般為+10Pa。


    3、擴(kuò)增區(qū):主要進(jìn)行DNA擴(kuò)增。此外,已制備的DNA模板的加入和主反應(yīng)混合液制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。本區(qū)主要設(shè)備有:擴(kuò)增儀,冰箱,離心機(jī),加樣器等。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為負(fù)壓,以避免氣溶從本區(qū)漏出一般為-25Pa。


    4、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū):擴(kuò)增產(chǎn)物的測定。本區(qū)主要設(shè)備有酶標(biāo)儀,洗板機(jī).加樣器和水浴箱等。本區(qū)的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區(qū)域為負(fù)壓,一般為-25Pa,以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散至其它區(qū)域。


    三、PCR實驗室通風(fēng)系統(tǒng)及壓力控制

    各區(qū)域之間應(yīng)具備單間的實驗工藝流,物流,人流與氣流,形成單向流程的保護(hù)屏障,避免實驗室之間的相互干擾,防止氣溶膠擴(kuò)散對實驗過程造成污染。PCR實驗室并沒有嚴(yán)格的凈化要求,但是為避免各個實驗區(qū)域交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式,嚴(yán)格控制送,排風(fēng)的比例以保證個實驗區(qū)的壓力要求。


    、PCR實驗室裝飾

    實驗室圍護(hù)結(jié)構(gòu)應(yīng)牢固,氣密性好;所有陰陽角宜采用圓弧過度;墻體內(nèi)壁光潔,不積塵,耐腐蝕,易清洗消毒;地面使用PVC卷材或環(huán)氧樹脂自流坪,材料應(yīng)滿足無縫隙,無滲漏,光潔,耐腐蝕的要求。


    、PCR實驗室注意事項

    1、試劑準(zhǔn)備區(qū),樣品制備區(qū)設(shè)緊急洗眼器,以保證操作人員的安全。

    2、幾個區(qū)域的大小設(shè)置情況,試劑準(zhǔn)備區(qū),擴(kuò)增區(qū),擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū),空間可以相對小一些,樣品制備區(qū)要放置生物安全柜和低溫冰箱,空間應(yīng)大一些。


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